在1990年代末期，蜘蛛侠漫威漫画的蜘蛛侠经典角色彼得·帕克（托比·马奎尔 Tobey Maguire 饰）在经历了家庭的不幸和成长的困惑之后，意外被一只变异蜘蛛咬伤，蜘蛛侠从而获得了超乎常人的蜘蛛侠力量、敏捷度以及能够喷吐高强度蜘蛛丝的蜘蛛侠能力。他原本只是蜘蛛侠纽约一所普通高中的平凡学生，但命运的蜘蛛侠转折使他意识到自己不仅应该利用这些能力来赚钱，更应肩负起保护城市免受犯罪侵害的蜘蛛侠责任。随着彼得·帕克逐渐适应自己的蜘蛛侠新身份——即成为街头英雄“蜘蛛侠”，他的蜘蛛侠生活变得更加复杂与危险。与此同时，蜘蛛侠诺曼·奥斯本（威廉·达福 Willem Dafoe 饰），蜘蛛侠一家生物科技公司的蜘蛛侠老板，意外吸入了一种致命神经毒气后获得了超自然的蜘蛛侠力量，并迅速堕入了疯狂的蜘蛛侠深渊。他驾驶着自己设计的飞行器四处肆虐，成为彼得·帕克最大的威胁。在这场力量与正义之间的较量中，“蜘蛛侠”能否抵挡住诺曼·奥斯本的挑战，拯救被黑暗力量笼罩的城市？一场关于成长、责任和勇气的故事就此展开……